起源
Pseudomonas testosteroni
化学式
3α-Hydroxysteroid | 3-oxosteroid |
形状
凍結乾燥物
比活性
90 units/mg 以上(タンパク質1 mg当りの国際単位)
単位の定義
pH8.9、25℃においてNADの存在下、1分間に基質Androsterone 1μmolを酸化するに要する酵素量を1 unitとする。
保存方法
5℃以下で保存すれば、12ヶ月間活性の低下は殆ど認められない。室温でも少なくとも1週間は安定である。
なお、凍結保存(-20℃)すれば、長期間安定に保存できる。
夾雑酵素
Malate dehydrogenase | < 0.01% |
Lactate dehydrogenase | < 0.01% |
Alcohol dehydrogenase | < 0.01% |
β-Hydroxysteroid dehydrogenase | < 0.5 % |
一般的性質
分子量 | 約 37,000 Da |
---|---|
至適pH | 10.2~10.5 |
至適温度 | 50℃ |
pH安定性 | 6.0~9.5 (30℃, 17hr) |
熱安定性 | 50℃以下(pH7.2, 10min) |
Km値 | 6.7×10-6M(Androsterone) 8.3×10-6M(Na-cholate) 6.7×10-5M(NAD) |
用途
胆汁酸の定量
活性測定法
光路 1 cm のキュベット中に100 mM ピロリン酸緩衝液(pH8.9) 1.0 ml、15 mM NAD溶液(pH7.0~7.5) 0.2 ml、蒸留水 1.6 ml、及び酵素液 0.1 ml(約 0.4 unit/ml)を加え、25℃に平衡化後、4 mM Androsterone-メタノール溶液 0.1 ml を加えて直ちに反応を開始し、対照の蒸留水に対して 340 nmでの初期吸光度増加(反応開始後 30~90秒間の1分間の ΔA340)を読み取り、活性は
計算式:
unit/キュベット | = ΔA340/min×3÷6.22 |
3 | = キュベット中の液量(ml) |
6.22 | = NADHのミリモル分子吸光係数 |
により算出する。なお、酵素の希釈としては 0.1% Bovine serum albuminを含む緩衝液(30 mM リン酸緩衝液、pH7.2)を使用する。
包装単位
10 units, 50 units